一、腎小管間質(zhì)纖維化模型背景簡(jiǎn)介
以不溶性結(jié)晶的形式大量沉積于腎小管,引起腎小管阻塞,導(dǎo)致腎后梗阻,造成腎小管部分?jǐn)U張、變性和壞死,間質(zhì)淋巴和單核細(xì)胞浸潤(rùn),并可見(jiàn)成纖維細(xì)胞增生。病變晚期可見(jiàn)2,8-二羥基腺嘌呤結(jié)晶,周?chē)纬纱罅咳庋磕[樣增生結(jié)節(jié),腎間質(zhì)廣泛纖維化。
二、腎小管間質(zhì)纖維化模型簡(jiǎn)介
TIF的病因復(fù)雜、臨床病程漫長(zhǎng),對(duì)其病理過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究比較困難,因此,典型而穩(wěn)定的動(dòng)物模型是研究TIF的重要手段。常見(jiàn)TIF實(shí)驗(yàn)?zāi)P徒⒎椒òㄋ幬镎T導(dǎo)、免疫介導(dǎo)、腎次全切除、單側(cè)尿路阻塞、放射損傷等方法,均有各種不足和弊端,難以獲得穩(wěn)定的結(jié)果。
三、腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建方法
3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
Wistar雄性大鼠,6周齡
3.2實(shí)驗(yàn)材料
雌二醇,ssd,ss縫合線
3.3模型構(gòu)建流程
動(dòng)物和試劑 選用Wistar雄性大鼠,體重150~200g,適應(yīng)環(huán)境1周后,隨機(jī)分組。分籠飼養(yǎng),自由飲食。造模前將腺嘌呤以2%淀粉溶液溶解,制成混懸液。
2.模型制備 模型組以150mg/kg腺嘌呤混懸液灌胃,對(duì)照組以相同體積的淀粉溶液灌胃。1次/天,連續(xù)17周。
3.樣本采集和指標(biāo)測(cè)定 分別于第3、7、12、17周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)收獲動(dòng)物樣本,進(jìn)行功能學(xué)、組織學(xué)、免疫組化檢測(cè)與觀察。
三、模型驗(yàn)證
功能學(xué)檢查:測(cè)定24小時(shí)尿蛋白含量、尿中尿N乙酰β葡萄糖苷酶含量、血清中Cr和BUN含量。
組織學(xué)觀察:分別于實(shí)驗(yàn)的第7、12、17周處死動(dòng)物,腎組織H&E常規(guī)染色和Masson染色。光鏡下計(jì)算腎間質(zhì)纖維化指數(shù)。高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野測(cè)定間質(zhì)纖維化面積與同視野小管間質(zhì)總面積的百分比。